高效液相色譜儀(HPLC)是應(yīng)用高效液相色譜原理，主要用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機(jī)化合物的儀器設(shè)備。它由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運(yùn)動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。HPLC廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、食品科學(xué)、藥物研究以及環(huán)境研究中。 LC-310高效液相色譜儀的儀器本身是記錄樣品通過檢測器時，吸光度的變化而產(chǎn)生的電信號變化，從而產(chǎn)生色譜譜圖，最終的結(jié)果就要靠后期的色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。
譜圖處理完即可制作校正曲線，校正曲線是數(shù)據(jù)處理的重點(diǎn)，是將標(biāo)樣譜圖的信息與數(shù)據(jù)做成一個標(biāo)準(zhǔn)，供處理試樣譜圖使用。校正是通過分析指定的準(zhǔn)備好的標(biāo)準(zhǔn)樣品，來確定計(jì)算絕對組分濃度的響應(yīng)因子的過程。接下來介紹常用的數(shù)據(jù)處理方法：
1.外標(biāo)法
外標(biāo)法是指添加一定量的標(biāo)準(zhǔn)品于空白樣品中制成對照樣品，與未知檢測樣品平行進(jìn)行樣品處理并檢測，根據(jù)對照品響應(yīng)值與標(biāo)準(zhǔn)品的濃度函數(shù)關(guān)系計(jì)算出未知檢測樣品中被測組分濃度的定量方法。
2.內(nèi)標(biāo)法
內(nèi)標(biāo)法指的是將一定重量的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物加到一定量的被測樣品混合物中，然后對含有內(nèi)標(biāo)物的樣品進(jìn)行色譜分析，分別測定內(nèi)標(biāo)物和待測組分的峰面積及相對校正因子，按公式計(jì)算出被測組分的含量。
3.兩種數(shù)據(jù)處理方法的區(qū)別
內(nèi)標(biāo)法是把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加入到被測樣品中，外標(biāo)法不是把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加入到被測樣品中，而是在與被測樣品相同的色譜條件下單獨(dú)測定。
1、外標(biāo)法要求儀器重復(fù)性很嚴(yán)格，適于大量的分析樣品，因?yàn)閮x器隨著使用會有所變化，因此需要定期進(jìn)行曲線校正。此法的特點(diǎn)是操作簡單，計(jì)算方便，不需測量校正因子，適于自動分析。但儀器的重現(xiàn)性和操作條件的穩(wěn)定性必須保證，否則，會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
2、內(nèi)標(biāo)法要求挺嚴(yán)格的，對于內(nèi)標(biāo)物的選擇要有一定的原則，適于分析樣品量較少的情況；不要求樣品里的所有組分都出峰，只要內(nèi)標(biāo)物和所關(guān)注的組分出峰并分離好就可以了；定量準(zhǔn)確，對進(jìn)樣量和操作條件的控制不很嚴(yán)格，但必須準(zhǔn)確稱量試樣和內(nèi)標(biāo)物，否則會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
